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军队文职招聘考试

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简述酶沉淀分离的主要方法及其原理。

正确答案:沉淀分离的方法主要有盐析沉淀法、等电点沉淀法、有机溶剂沉淀法、复合沉淀法、选择性变性沉淀法等。
(1)、盐析沉淀法:盐析沉淀法简称盐析法,是利用不同蛋白质在不同的盐浓度条件下溶解度不同的特性,通过在酶液中添加一定浓度的中性盐。使酶或杂质从溶液中析出沉淀,从而使酶与杂质分离的过程。蛋白质在水中的溶解度收到溶液中盐浓度的影响。在盐浓度达到到一定浓度后,蛋白质的溶解度随盐浓度的升高而降低,结果使蛋白质沉淀析出,这种现象称为盐析。在某一浓度的盐浓度中,不同蛋白质的溶解度各不相同,由此可达到彼此分离的目的。盐之所以会改变蛋白质的溶解度,是由于盐在溶液中离解为正离子和负离子。由于反离子作用,使蛋白质分子表面的电荷改变,同时由于离子的存在改变了溶液中水的活度,使分子表面的水化膜改变。
(2)、等电点沉淀法:利用两性电解质在等电点时溶解度最低,以及不同的两性电解质有不同的等电点这一特性,通过调节溶液的pH,使酶或杂质沉淀析出,从而使酶与杂质分离的方法称为等电点沉淀法。在溶液的pH等于溶液中某两性电解质的等电点时,该两性电解质分子的净电荷为零,分子间的静电斥力消除,使分子能聚集在一起而沉淀下来。
(3)、有机溶剂沉淀法:利用酶与其他杂质在有机溶剂中的溶解度不同,通过添加一定量的某种有机溶剂,使酶或杂质沉淀析出,从而使酶与杂质分离的方法称为有机溶剂沉淀法。有机溶剂之所以能使酶沉淀析出。主要是由于有机溶剂的存在会使溶剂的介电常数降低。溶液的介电常数降低,就使溶质分子间的静电引力增大,互相吸引而易于凝集,同时,对于具有水膜的分子来说,有机溶剂与谁互相作用,使溶质分子表面的水膜破坏,也使其溶解度降低而沉淀析出。
(4)、复合沉淀法:在酶液中加入某些物质,使它与酶形成复合物而沉淀下来,从而使酶与杂质分离的方法称为复合沉淀法。复合沉淀法可以与酶分子形成复合物,复合物的溶解度降低,从而使沉淀析出,(5)、选择性变性沉淀法:选择一定的条件使酶液中存在的某些杂蛋白等杂质变性沉淀,而不影响所需的酶,这种分离方法称为选择性变性沉淀。选择性变性沉淀法是选择某个适宜的条件某些杂质而沉淀析出,而又对酶没有明显影响,所以可以达到分离的目的。
答案解析:
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