简述体外表达基因的操作？
正确答案:①获得目的基因：设计引物，利用RT-PCR技术体外扩增目的基因。
②构建酵母表达载体：将具有复制起始位点、酶切位点、选择标记的pBR322质粒载体组装上启动子、终止子、核糖体结合位点等表达元件，并在起始密码与目的基因之间加入一个信号肽，构建成酵母表达载体，使目的蛋白能分泌到胞外。
③目的基因与酵母表达载体连接：用两种限制性内切核酸酶消化表达载体DNA和生长素DNA片段，使载体和目的基因的两端分别形成不同的黏性末端，将它们混合，在连接酶的作用下相同的黏性末端可退火连接成重组DNA分子，从而实现酵母表达载体DNA和目的基因DNA的定向连接。
④转化及阳性克隆筛选：将重组DNA导入酵母菌细胞，经过培养扩增后，利用抗药性标记插入失活选择法在选择培养基上筛选出阳性克隆。
⑤阳性克隆表达鉴定：挑取阳性克隆接种于麦氏琼脂培养基进行扩大培养，沉淀收集产物，利用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测，得到目的基因表达产物。
②构建酵母表达载体：将具有复制起始位点、酶切位点、选择标记的pBR322质粒载体组装上启动子、终止子、核糖体结合位点等表达元件，并在起始密码与目的基因之间加入一个信号肽，构建成酵母表达载体，使目的蛋白能分泌到胞外。
③目的基因与酵母表达载体连接：用两种限制性内切核酸酶消化表达载体DNA和生长素DNA片段，使载体和目的基因的两端分别形成不同的黏性末端，将它们混合，在连接酶的作用下相同的黏性末端可退火连接成重组DNA分子，从而实现酵母表达载体DNA和目的基因DNA的定向连接。
④转化及阳性克隆筛选：将重组DNA导入酵母菌细胞，经过培养扩增后，利用抗药性标记插入失活选择法在选择培养基上筛选出阳性克隆。
⑤阳性克隆表达鉴定：挑取阳性克隆接种于麦氏琼脂培养基进行扩大培养，沉淀收集产物，利用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测，得到目的基因表达产物。
答案解析:有
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