什么是酶的体外定向进化,原理及一般流程。
正确答案:酶的体外定向进化,又称实验分子进化,属于蛋白质的非合理设计,它不需事先了解酶的空间结构和催化机制,通过人为的创造特殊的条件,模拟自然进化机制(随机突变、重组和自然选择),在体外改造酶基因,并定向选择出所需性质的突变酶。
原理:在待进化酶基因的PCR扩增反应中,利用TaqDNA聚合酶不具有3’->5’校对功能的性质,配合适当条件,以很低的比率向目的基因中随机引入突变,构建突变库,凭借定向的选择方法,选出所需性质的优化酶(或蛋白质)。从而排除其他突变体。
流程:
1.因的选择:选择编码所需蛋白质的DNA序列
2.变或重组:通过易错PCR引入随即突变或DNAShuffling等方法增加基因序列的多样性。
3.变基因文库的构建:将获得的突变重组基因插入到表达载体中的构建突变库。
4.变体酶的表达:将载体转入受体细胞表达变异酶。
5.的基因鉴定:利用筛选和选择方法确定有益的特性克隆。
6.离改良基因并重复上述过程,直至获得所需性质的蛋白质。
原理:在待进化酶基因的PCR扩增反应中,利用TaqDNA聚合酶不具有3’->5’校对功能的性质,配合适当条件,以很低的比率向目的基因中随机引入突变,构建突变库,凭借定向的选择方法,选出所需性质的优化酶(或蛋白质)。从而排除其他突变体。
流程:
1.因的选择:选择编码所需蛋白质的DNA序列
2.变或重组:通过易错PCR引入随即突变或DNAShuffling等方法增加基因序列的多样性。
3.变基因文库的构建:将获得的突变重组基因插入到表达载体中的构建突变库。
4.变体酶的表达:将载体转入受体细胞表达变异酶。
5.的基因鉴定:利用筛选和选择方法确定有益的特性克隆。
6.离改良基因并重复上述过程,直至获得所需性质的蛋白质。
答案解析:有
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