已知植物叶绿体中的蛋白A分子量为72KD,由393个氨基酸组成,具有两个相同的亚基,其等电点为6.8-6.9,植物叶绿体内存在另一蛋白B分子量为73KD,具有四个相同的亚基,等电点为8.2-8.3,如何分离和鉴别该植物叶绿体蛋白A?要求写出具体的实验流程和每个步骤的原理。
正确答案:1.破碎细胞
2.提取纯化叶绿体
3.用pH8.25缓冲液破碎叶绿体
4.离心去除沉淀(沉淀含有蛋白B)收集上清液(含有蛋白A)
5.缓慢调解上清液pH到6.8-6.9,离心收集沉淀(含有蛋白A)
6.用pH到6.8-6.9的缓冲液洗涤沉淀.离心收集沉淀.
7.最后溶解于pH7.6-7.8的比如pBS中
8.鉴定SDS-PAGE(加2mer等还原剂),电泳观察条带数目和分子量
2.提取纯化叶绿体
3.用pH8.25缓冲液破碎叶绿体
4.离心去除沉淀(沉淀含有蛋白B)收集上清液(含有蛋白A)
5.缓慢调解上清液pH到6.8-6.9,离心收集沉淀(含有蛋白A)
6.用pH到6.8-6.9的缓冲液洗涤沉淀.离心收集沉淀.
7.最后溶解于pH7.6-7.8的比如pBS中
8.鉴定SDS-PAGE(加2mer等还原剂),电泳观察条带数目和分子量
答案解析:有
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