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军队文职招聘考试

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哪些因素影响Tm值的大小?

正确答案:影响Tm的因素主要有:
①G-C对含量。G-C对含3个氢键,A-T对含2个氢键,故G-C对相对含量愈高,Tm亦越高。在0.15mol/LNaCl,0.015mol/L柠檬酸钠溶液(1×SSC)中,经验公式为:(G+C)%=(Tm-69.3)×2.44。
②溶液的离子强度。离子强度较低的介质中,Tm较低。在纯水中,DNA在室温下即可变性。分子生物学研究工作中需核酸变性时,常采用离子强度较低的溶液。
③溶液的pH。高pH下,碱基广泛去质子而丧失形成氢键的有力,pH大于11.3时,DNA完全变性。pH低于5.0时,DNA易脱嘌呤,对单链DNA进行电泳时,常在凝胶中加入NaOH以维持变性关态。
④变性剂。甲酰胺、尿素、甲醛等可破坏氢键,妨碍碱堆积,使Tm下降。对单链DNA进行电泳时,常使用上述变性剂。
答案解析:
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