简述采用鸡胚进行流感病毒分离培养的操作步骤。
正确答案:
1)标本接种:
①选9~11日龄鸡胚,用验蛋器检查后,弃去死胚及发育不好的鸡胚,在照卵灯上画出气室及胚胎位置。
②鸡胚气室朝上,75%酒精消毒后,在气室端近胚胎处用钻孔器钻一个小孔,用无菌尖吸管向小孔内加1滴无菌液体石蜡,使胚胎更清晰。
③用1ml注射器吸取处理过的标本,以10~20角度插入鸡胚颚下胸前,在羊膜腔内接种0.2ml,再将针头稍后退,于尿囊腔内接种0.2ml,每份标本接种3个鸡胚。
④接种后用胶布封口,放34℃温箱孵育72h。
2)收获:
①收获前将鸡胚放4℃冰箱过夜。
②70%酒精消毒鸡胚气室部分,用镊子去掉气室部的蛋壳。
③用眼科镊子小心撕破壳膜及尿囊腔,将鸡胚轻轻推向一侧。
④用毛细管吸取尿囊液,装入小试管内。
⑤将羊膜提起呈伞状,将毛细管插入,吸取羊水。
⑥在有机板上每个鸡胚的尿囊液和羊水各加2滴及等量1%鸡血球,摇匀,室温放置45分钟后看结果。出现凝集为阳性,用血凝试验测定效价,如滴度低或阴性则混合每份标本的收集液,盲传二代,仍为阴性可报告结果为阴性。
①选9~11日龄鸡胚,用验蛋器检查后,弃去死胚及发育不好的鸡胚,在照卵灯上画出气室及胚胎位置。
②鸡胚气室朝上,75%酒精消毒后,在气室端近胚胎处用钻孔器钻一个小孔,用无菌尖吸管向小孔内加1滴无菌液体石蜡,使胚胎更清晰。
③用1ml注射器吸取处理过的标本,以10~20角度插入鸡胚颚下胸前,在羊膜腔内接种0.2ml,再将针头稍后退,于尿囊腔内接种0.2ml,每份标本接种3个鸡胚。
④接种后用胶布封口,放34℃温箱孵育72h。
2)收获:
①收获前将鸡胚放4℃冰箱过夜。
②70%酒精消毒鸡胚气室部分,用镊子去掉气室部的蛋壳。
③用眼科镊子小心撕破壳膜及尿囊腔,将鸡胚轻轻推向一侧。
④用毛细管吸取尿囊液,装入小试管内。
⑤将羊膜提起呈伞状,将毛细管插入,吸取羊水。
⑥在有机板上每个鸡胚的尿囊液和羊水各加2滴及等量1%鸡血球,摇匀,室温放置45分钟后看结果。出现凝集为阳性,用血凝试验测定效价,如滴度低或阴性则混合每份标本的收集液,盲传二代,仍为阴性可报告结果为阴性。
答案解析:有
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