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分子诊断学

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简述TGGE/DGGE的基本原理。

正确答案: 在TGGE中,随着温度的逐渐升高时,DNA分子会呈阶梯式逐步发生解链。部分解链的双链DNA分子表现出一种复杂的分枝构像,使得其电泳迁移率大大下降。DNA分子的解链决定于该分子的解链温度(Tm),而Tm有强烈的序列依赖性,如在单取代突变中,若是A:T(两个氢键)被G://C(三个氢键)取代,将增加该双链DNA分子的Tm值。而整个DNA分子序列对解链温度也有影响,若A:T被T:A替代,或G://C被C://G替代,分子的解链温度也会发生改变。因此不同的DNA分子由于其Tm不同,将于不同凝胶位置(温度不同)产生分枝(解离)使电泳迁移率降低,从而在凝胶上的不同位置形成条带。
DGGE的变性条件为热(一般为60℃的恒定温度)和固定比率的甲酰胺(0-40%)、尿素(0-7M)。这些梯度变性的功能就相当于TGGE中的温度梯度的功能,使不同DNA分子在不同的凝胶部位发生解链,引起迁移率下降,从而将不同的DNA分子分离。
答案解析:
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