从细胞破碎到蛋白质复性可以走不同的工艺路线。此工艺路线主要有哪三种?分别有哪些特点?
正确答案:
1)机械破碎(高压匀浆、高速珠磨法)-离心法提取出包涵体-加变性剂溶解-除去变性剂。
此路线利用了包涵体与细胞碎片的密度差,用离心法将包涵体与细胞碎片和可溶性蛋白质分开,获得了干净的包涵体,在对包涵体溶解复性。
这样首先就摆脱了大量的杂蛋白、核酸、热原、内毒素等杂质,使后面的分离纯化简单化了。
缺点:要经过几次离心才能除去大部分细胞碎片,加工时间较长。
2)机械破碎-膜分离除可溶性蛋白-变性剂溶解包涵体-除变性剂复性。
此路线应用了膜分离技术,用微孔膜除去可溶性蛋白质,但细胞碎片却和包涵体一起被膜挡住,难以分开;而且膜的堵塞和浓差极化常常导致可溶性蛋白质的直流,因此这条路线的问题较多。
优点:膜分离是封闭式操作,不污染环境也不受环境污染,能量消耗也比离心法少。
3)化学破碎(加变性剂),离心除细胞碎片-除变性剂复性。
此路线是用化学法破菌,所采用的试剂既可以破菌有可以溶解包涵体,将两道工序合为一道,节省了设备和时间,比前两者更适合于实验室操作。
缺点:所有的可溶性杂质都没有被除去,混杂在产物中间,给后分离带来困难。
此路线利用了包涵体与细胞碎片的密度差,用离心法将包涵体与细胞碎片和可溶性蛋白质分开,获得了干净的包涵体,在对包涵体溶解复性。
这样首先就摆脱了大量的杂蛋白、核酸、热原、内毒素等杂质,使后面的分离纯化简单化了。
缺点:要经过几次离心才能除去大部分细胞碎片,加工时间较长。
2)机械破碎-膜分离除可溶性蛋白-变性剂溶解包涵体-除变性剂复性。
此路线应用了膜分离技术,用微孔膜除去可溶性蛋白质,但细胞碎片却和包涵体一起被膜挡住,难以分开;而且膜的堵塞和浓差极化常常导致可溶性蛋白质的直流,因此这条路线的问题较多。
优点:膜分离是封闭式操作,不污染环境也不受环境污染,能量消耗也比离心法少。
3)化学破碎(加变性剂),离心除细胞碎片-除变性剂复性。
此路线是用化学法破菌,所采用的试剂既可以破菌有可以溶解包涵体,将两道工序合为一道,节省了设备和时间,比前两者更适合于实验室操作。
缺点:所有的可溶性杂质都没有被除去,混杂在产物中间,给后分离带来困难。
答案解析:有
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